Article Annexe V AUTONOME ABROGE, en vigueur du au (Arrêté du 10 juillet 1986 relatif à l'entrée en France de viandes fraîches d'animaux de boucherie destinées à la consommation)
Article Annexe V AUTONOME ABROGE, en vigueur du au (Arrêté du 10 juillet 1986 relatif à l'entrée en France de viandes fraîches d'animaux de boucherie destinées à la consommation)
a) Appareillage et réactifs :
- un couteau ou des ciseaux pour découper les échantillons ;
- des plateaux divisés en 50 carrés pouvant contenir chacun des échantillons de viande d'environ 2 grammes ;
- un "blender" Trichomatic 35 avec dispositif de filtration ;
- solution d'acide chlorhydrique 8,5 p. 100 + ou - 0,5 p. 100 en poids ;
- des filtres à membrane de polycarbonate transparent d'un diamètre de 50 millimètres et dont les pores mesurent 14 microns ;
- pepsine à la concentration 1 : 10 000 NF (U.S. National Formulary), correspondant à 1 : 12 500 B.P. (British Pharmacopoea), correspondant à 2 000 F.I.P. (Fédération internationale de pharmacie) ;
- une balance d'une précision de 0,1 gramme ;
- des pinces à bouts plats ;
- plusieurs lamelles porte-objets d'une largeur d'au moins 5 centimètres ou plusieurs boîtes de Petri d'un diamètre d'au moins 6 centimètres dont le fond a été divisé en carrés de 10 x 10 millimètres à l'aide d'un instrument pointu ;
- un (stéréo)microscope à lumière transmise (grossissement : 15 à 60 fois) ou un trichinoscope à table horizontale ;
- une poubelle pour récolter les liquides résiduels ;
- plusieurs poubelles de 10 litres à employer lors de la décontamination, par un traitement tel que le formol, de l'appareillage et pour le suc digestif restant en cas de résultat positif.
b) Prélèvement des échantillons :
1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'approximativement 2 grammes dans un des piliers du diaphragme, dans la zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse ; s'il n'y a pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sous les muscles masticateurs, ou encore sur la musculature abdominale.
2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximativement 2 grammes dans les muscles squelettiques contenant peu de graisse et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.
c) Méthode :
1. Procédé de digestion :
- placer le "blender" équipé du dispositif de filtration, relier le tuyau de décharge et introduire le tube dans la poubelle ;
- lorsque le "blender" est allumé, le chauffage commence ;
- avant de commencer, ouvrir le bouton situé en dessous de l'enceinte de réaction et le fermer ;
- ajouter ensuite jusqu'à 35 échantillons d'environ 1 gramme chacun (à 25-30° C) prélevés sur chacun des échantillons individuels conformément au point b. S'assurer qu'il n'y a plus de gros morceaux de tendons qui pourraient adhérer au filtre de la membrane ;
- verser de l'eau dans le récipient relié au "blender" (approximativement 400 millilitres) ;
- verser environ 30 millilitres d'acide chlorhydrique (8,5 p. 100) dans le récipient contenant le liquide de digestion ;
- placer le filtre à membrane sous le filtre grossier dans le dispositif de filtrage ;
- ajouter enfin 7 grammes de pepsine. Il convient de se conformer strictement à l'ordre d'addition pour éviter la décomposition de la pepsine ;
- fermer le couvercle de l'enceinte de réaction et du récipient contenant le liquide de digestion ;
- sélectionner la période de digestion : courte période de digestion (5 minutes) pour les porcs à l'âge normal de l'abattage et durée de digestion plus longue (8 minutes) pour les autres échantillons ;
- la mise en route est automatique lorsqu'on appuie sur le bouton "ad hoc" du "blender" ; la digestion, suivie de la filtration s'enclenchera automatiquement ;
- après 10 à 13 minutes, le processus est terminé et s'arrête automatiquement ;
- ouvrir le couvercle de l'enceinte de réaction s'il est établi que l'enceinte est vide. S'il y a de la mousse ou des restes du liquide de digestion dans le récipient, répéter le mode opératoire conformément au point c sous 4.
2. Isolement des larves :
- démonter le support filtre et transférer le filtre à membrane sur une lamelle porte-objet ou dans une boîte de Petri ;
- examiner les filtres à membrane à l'aide d'un microscope ou d'un trichinoscope.
3. Nettoyage de l'équipement :
- en cas de résultat positif, remplir d'eau bouillante l'enceinte de réaction du "blender" jusqu'aux deux tiers. Verser de l'eau de la distribution dans le récipient de connexion jusqu'à ce que le niveau du capteur inférieur soit recouvert. Mettre en oeuvre le programme de nettoyage automatique. Décontaminer le porte-filtre ainsi que le reste de l'équipement, par exemple par un traitement au formol ;
- à la fin de la journée de travail, remplir d'eau le récipient contenant le liquide du "blender" et mettre en route un programme normal.
4. Utilisation de filtres à membrane :
Aucun filtre à membrane en polycarbonate ne peut être utilisé plus de cinq fois. Retourner le filtre après chaque usage. En outre, vérifier le filtre après chaque usage pour déterminer s'il a subi un dommage, ce qui le rendrait impropre à toute autre utilisation.
5. Méthode à utiliser lorsque la digestion est incomplète et que la filtration ne peut donc être mise en oeuvre :
Lorsque le processus automatique dans le "blender" est mis en oeuvre conformément au point c sous 1, ouvrir le couvercle de l'enceinte de réaction et vérifier s'il y reste de la mousse ou du liquide. Si tel est le cas, appliquer le mode opératoire suivant :
- fermer la valve située en dessous de l'enceinte de réaction ;
- démonter le porte-filtre et transférer le filtre à membrane sur une lamelle porte-objet ou dans une boîte de Petri ;
- placer un nouveau filtre à membrane sur un porte-filtre et monter le porte-filtre ;
- verser de l'eau dans le récipient du "blender" contenant le liquide de digestion jusqu'à ce que le niveau du capteur inférieur soit recouvert ;
- mettre en oeuvre le programme de nettoyage automatique ;
- une fois que le programme de nettoyage est terminé, ouvrir le couvercle de l'enceinte de réaction et vérifier s'il reste du liquide ;
- si la chambre est vide, démonter le porte-filtre et, à l'aide d'une pince, transférer le filtre à membrane sur une lamelle porte-objet ou dans une boîte de Petri ;
- les deux filtres à membrane sont examinés conformément au point c sous 2. Si les filtres ne peuvent être examinés, répéter tout le processus de digestion pendant un temps allongé conformément au point c sous 1.
6. En cas de résultat positif ou incertain donné par un échantillon collectif, il convient de prélever un nouvel échantillon de 20 grammes, sur chaque porc, conformément au point b ci-dessus. Ces échantillons sont analysés individuellement conformément à la méthode susmentionnée.