Article Annexe AUTONOME VIGUEUR, en vigueur depuis le (Arrêté du 2 juin 1955 portant description de méthodes d'analyse en vue du contrôle de la qualité bactériologique des laits destinés à la consommation humaine)
Article Annexe AUTONOME VIGUEUR, en vigueur depuis le (Arrêté du 2 juin 1955 portant description de méthodes d'analyse en vue du contrôle de la qualité bactériologique des laits destinés à la consommation humaine)
A - Milieu de culture : eau peptonée.
Peptone bactériologique exempte d'indol, 15 g.
Chlorure de sodium, 5 g.
Eau distillée Q.s.p., 1.000 ml.
Dissoudre à chaud ; amener le pH entre 7 et 7,4, s'il y a lieu.
Répartir en tubes à essais à raison de 10 ml environ par tube et stériliser à l'autoclave à 115 degrés C pendant vingt minutes.
B - Réactif : réactif d'Ehrlich-Kovacs.
Paradiméthylaminobenzaldéhyde, 3 g.
Alcool amylique ou isoamylique du Codex, 75 ml.
Acide chlorhydrique (D. 1,19), 25 ml.
Triturer au mortier la diméthylaminobenzaldéhyde avec l'alcool amylique ou isoamylique pur. Ajouter lentement l'acide chlorhydrique. Le réactif obtenu doit être incolore ou très faiblement coloré et conservé à l'obscurité.
C - Mode opératoire.
a) A partir des trois dilutions en eau salée stérile (au 1/10, 1/100, 1/1.000) préparées en vue du dénombrement microbien, porter respectivement 1 ml (c'est-à-dire 1/10, 1/100, 1/1.000 de ml de lait) dans trois tubes d'eau peptonée stérile.
b) Si l'on désire vérifier l'absence de tout germe indologène dans 1 ml de lait, porter, en outre, 1 ml de lait lui-même dans un ballon de 100 ml environ, contenant au moins 60 ml de la même eau peptonée.
Après quarante-huit heures de séjour à l'étuve à 37 degrés C, rechercher la formation d'indol en ajoutant dans chaque tube environ 0,5 ml du réactif d'Ehrlich-Kovacs : l'apparition d'un anneau de coloration rouge vif à la surface de la culture témoigne de la présence d'indol (réaction positive). Dans le cas du ballon, verser quelques millilitres de la culture de quarante-huit heures dans un tube à essais et procéder comme il vient d'être dit. Si, dans ce cas, la réaction de l'indol est négative, il est indiqué de repiquer 1/10 de millilitre de la culture dans un tube d'eau peptonée qui sera placé à l'étuve à 37 degrés C pendant quarante-huit heures ; après ce délai, on recherchera l'indol.
Dans tous les cas, examiner d'abord la culture contenant la dilution de lait la plus grande (tube au 1/1.000), puis celle contenant la dilution au 1/100 et ainsi de suite. En opérant dans cet ordre, le premier tube positif indique l'ordre de grandeur du nombre des indologènes (plus de 1.000, entre 100 et 1.000, entre 10 et 100, entre 1 et 10, moins de 1).