Article Annexe AUTONOME VIGUEUR, en vigueur depuis le (Arrêté du 2 juin 1955 portant description de méthodes d'analyse en vue du contrôle de la qualité bactériologique des laits destinés à la consommation humaine)
Article Annexe AUTONOME VIGUEUR, en vigueur depuis le (Arrêté du 2 juin 1955 portant description de méthodes d'analyse en vue du contrôle de la qualité bactériologique des laits destinés à la consommation humaine)
Principe.
La plupart des microbes du lait (ferments lactiques et saprophytes divers) modifient au cours de leur développement son potentiel d'oxydo-réduction). Cette modification peut être mise en évidence en additionnant le lait d'une substance colorée qui donne par réduction des dérivés de couleur différente.
La rapidité du changement de coloration de cette substance est fonction du nombre de microbes présents. La mesure du temps de changement de coloration peut donc permettre de se faire une idée du degré de contamination du lait.
Le produit coloré choisi est le bleu de méthylène qui donne par réduction un leuco-dérivé incolore.
Réactifs.
Solution de bleu de méthylène à la dose de 5 mg 100 ml d'eau distillée stérile (1).
Conserver cette solution à l'abri de la lumière et au froid.
Appareillage.
Bain-marie couvert, à thermostat, on étuve à 37 degrés C.
Tubes à essais stérilisés de 16 x 160 mm ou 14 x 140 mm.
Bouchons de caoutchouc correspondants, bouillis pendant cinq minutes immédiatement avant l'emploi.
Pipettes stérilisées de 10 ml et 1 ml.
Mode opératoire.
Introduire aseptiquement dans un tube à essais stérile :
10 ml de lait ;
1 ml de la solution de bleu de méthylène récemment préparée (une semaine). Boucher. Mélanger en retournant et redressant deux fois chaque tube. Porter au bain-marie ou à l'étuve. Dans ce dernier cas, il faut prendre soin de plonger auparavant les tubes dans un bain-marie à 37 degrés C ;
Couvrir le bain-marie ;
Mélanger à nouveau toutes les heures ;
Noter le temps de décoloration en observant la teinte du mélange aux temps suivants :
- immédiatement ;
- après quinze minutes ;
- après une heure ;
- après trois heures.
Négliger l'anneau bleu pâle non réduit qui persiste à la surface du lait par suite d'une réoxydation au contact de l'air.
Interprétation des résultats.
Une décoloration avant quinze minutes indique un lait très fortement contaminé. Si la décoloration a lieu en moins d'une heure, le lait est fortement contaminé. Entre une heure et trois heures, le lait est légèrement contaminé. Au-dessus de trois heures, le lait est considéré comme étant de qualité satisfaisante sous les réserves suivantes :
a) Certains microbes, tels que le streptocoque de la mammite contagieuse, ne décolorent pas le bleu de méthylène ;
b) Lorsque le lait a été additionné de formol en vue de sa conservation, on observe une décoloration plus rapide du bleu de méthylène due à l'enzyme de Schardinger.
(1) La dissolution d'une tablette de bleu de méthylène Orla-Jensen (Blauenfeld Tvede) dans 800 ml d'eau donne sensiblement cette concentration.