« Essai
« Aspect de la solution. Dissolvez 0,5 g de triméthoprime dans 10 ml d'un mélange de 1 volume d'eau R, de 4,5 volumes de méthanol R et de 5 volumes de chlorure de méthylène R. La solution n'est pas plus fortement colorée que la solution témoin JB7 (procédé II, 2.2.2).
« Substances apparentées.
« A. - Opérez par chromatographie liquide (2.2.29).
« Solution à examiner. Dissolvez 25,0 mg de triméthoprime dans la phase mobile et complétez à 25,0 ml avec la phase mobile.
« Solution témoin (a). Prélevez 1,0 ml de solution à examiner et complétez à 200,0 ml avec la phase mobile.
« Solution témoin (b). Dissolvez 5,0 mg de triméthoprime SCR et 2,5 mg d'impureté E de triméthoprime SCR dans la phase mobile et complétez à 100,0 ml avec la phase mobile. Prélevez 1,0 ml de cette solution et complétez à 10,0 ml avec la phase mobile.
« La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
« - une colonne d'acier inoxydable, d'une longueur de 0,250 m et d'un diamètre intérieur de 4,0 mm remplie de gel de silice octadécylsilylé pour chromatographie, désactivé pour les bases R (5 mm) ;
« - comme phase mobile, à un débit de 1,3 ml/min, un mélange de 30 volumes de méthanol R et de 70 volumes d'une solution à 1,4 g/l de perchlorate de sodium R ajustée à pH 3,6 avec de l'acide phosphorique R ;
« - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 280 nm.
« Injectez 20 ml de solution témoin (a). Ajustez la sensibilité du système de façon que la hauteur du pic principal du chromatogramme obtenu représente au moins 50 % de l'échelle totale de l'enregistreur. Injectez 20 ml de solution à examiner et 20 ml de solution (b). Continuez la chromatographie de la solution à examiner pendant 11 fois le temps de rétention du triméthoprime. Lorsque les chromatogrammes sont enregistrés dans les conditions décrites, les temps de rétention relatifs sont les suivants :
=============================================
Vous pouvez consulter le tableau dans le JO
n° 215 du 17/09/1998 page 14174 à 14185
=============================================
« L'essai n'est valable que si, dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin (b), la résolution entre les 2 pics principaux n'est pas inférieure à 2,5. S'il apparaît d'autres pics que le pic principal dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner, la surface d'aucun d'entre eux n'est supérieure à 0,2 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a) (0,1 %), et la somme de leur surface n'est pas supérieure à 0,4 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a) (0,2 %). Appliquez dans les 2 cas les facteurs de correction indiqués dans le tableau pour les impuretés B, E et J. Ne tenez pas compte des pics dont la surface est inférieure à 0,04 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a) et d'un pic correspondant à l'impureté H (temps de rétention relatif : 10,3 environ).
« B. - Opérez par chromatographie liquide (2.2.29).
« Solution à examiner. Dissolvez 25,0 mg de triméthoprime dans la phase mobile et complétez à 25,0 ml avec la phase mobile.
« Solution témoin (a). Prélevez 1,0 ml de solution à examiner et complétez à 200,0 ml avec la phase mobile.
« Solution témoin (b). Dissolvez 5,0 mg de triméthoprime SCR et 5,0 mg d'impureté B de triméthoprime SCR dans la phase mobile et complétez à 100,0 ml avec le même solvant.
« La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
« - une colonne d'acier inoxydable, d'une longueur de 0,250 m et d'un diamètre intérieur de 4,6 mm, remplie de gel de silice cyanopropylsilylé pour chromatographie R (5 mm) d'une surface spécifique de 350 m2/g et d'un diamètre de pores de 10 nm ;
« - comme phase mobile, à un débit de 0,8 ml/min, un mélange préparé comme suit : dissolvez 1,14 g d'hexanesulfonate de sodium R dans 600 ml d'une solution de phosphate monopotassique R à 13,6 g/l ; ajustez à pH 3,1 avec de l'acide phosphorique R et mélangez avec 400 volumes de méthanol R ;
« - comme détecteur, un spectrophotomètre réglé à 280 nm.
« Injectez 20 ml de solution témoin (a). Ajustez la sensibilité du système de façon que la hauteur des pics principaux du chromatogramme obtenu représente au moins 50 % de l'échelle totale de l'enregistreur. Injectez 20 ml de solution à examiner et 20 ml de solution témoin (b). Continuez la chromatographie de la solution à examiner pendant 6 fois le temps de rétention du triméthoprime. Lorsque les chromatogrammes sont enregistrés dans les conditions décrites, les temps de rétention relatifs sont les suivants :
=============================================
Vous pouvez consulter le tableau dans le JO
n° 215 du 17/09/1998 page 14174 à 14185
=============================================
« L'essai n'est valable que si, dans le chromatogramme obtenu avec la solution témoin (b), la résolution entre les 2 pics principaux n'est pas inférieure à 2,0. S'il apparaît d'autres pics que le pic principal dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner, la surface d'aucun d'entre eux n'est supérieure à 0,2 fois celle du pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a) (0,1 %), et la somme de leur surface n'est pas supérieure à 0,4 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a) (0,2 %). Appliquez dans les 2 cas les facteurs de correction indiqués dans le tableau pour les impuretés H et I. Ne tenez pas compte d'un pic dont la surface est inférieure à 0,04 fois celle du pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a).
« Métaux lourds (2.4.8). 1,0 g de triméthoprime satisfait à l'essai limite C des métaux lourds (20 ppm). Préparez le témoin avec 2 ml de solution à 10 ppm de plomb (Pb) R.
« Perte à la dessiccation (2.2.32). Déterminée à l'étuve à 100-105 oC sur 1,000 g de triméthoprime, la perte à la dessiccation n'est pas supérieure à 1,0 %.
« Cendres sulfuriques (2.4.14). Déterminé sur 1,0 g de triméthoprime, le taux des cendres sulfuriques n'est pas supérieur à 0,1 %.