« Dosage
« Opérez par chromatographie liquide (2.2.29) en utilisant de la sinigrine comme étalon externe.
« Solution d'étalon externe. Dans un ballon jaugé de 25,0 ml, dissolvez 3,0 mg de sinigrine dans 20 ml d'un mélange de 40 volumes d'eau et de 60 volumes de méthanol R et complétez à 25,0 ml avec le même mélange de solvants.
« Solution à examiner. Prélevez 50 g environ d'érysimum pulvérisé (355). Homogénéisez. A 5,0 g d'érysimum pulvérisé, ajoutez 100 ml d'un mélange de 45 volumes d'eau et de 55 volumes de méthanol R bouillant. Maintenez à reflux sous agitation magnétique pendant 15 minutes. Filtrez et reprenez le marc avec, à nouveau, 80 ml d'un mélange de 45 volumes d'eau et de 55 volumes de méthanol R. Procédez comme précédemment. Rincez le marc avec le même mélange de solvants et réunissez les filtrats. Homogénéisez par traitement aux ultrasons, à température ambiante, pendant 5 minutes. Filtrez sous pression réduite et transvasez quantitativement le filtrat dans une fiole jaugée de 200,0 ml. Complétez au trait de jauge avec le même mélange de solvants.
« La chromatographie peut être réalisée en utilisant :
« - une précolonne d'acier inoxydable d'une longueur de 20 mm et d'un diamètre intérieur de 4 mm, suivie d'une colonne d'acier inoxydable d'une longueur de 0,125 m et d'un diamètre intérieur de 4 mm, toutes deux remplies d'un gel de silice octadécysilylé pour chromatographie R (5 mm) ;
« - comme phase mobile, à un débit de 1 ml par minute, un mélange de 45 volumes d'une solution de phosphate disodique dihydraté R à 1,780 g/l et de 55 volumes d'une solution de bromure de tétraheptylammonium R à 2,451 g/l dans le méthanol R ;
« - une boucle d'injection de 20 ml ;
« - un spectrophotomètre réglé à 230 nm.
« Injectez séparément la solution à examiner et la solution témoin, à un débit de 1 ml par minute.
« Calculez la teneur pour cent en glucosinolates totaux exprimés en sinigrine à l'aide de l'expression :
A1 + A2 m2
x
x 800
A3
m1
« A1 = surface du pic de temps de rétention voisin de celui de la sinigrine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ;
« A2 = surface du pic, de temps de rétention immédiatement supérieur à celui de la sinigrine dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner ;
« A3 = surface du pic de la sinigrine dans le chromatogramme obtenu avec la solution étalon ;
« m1 = masse de la prise d'essai, en grammes ;
« m2 = masse de sinigrine dans la solution d'étalon externe, en grammes.